應用簡(jiǎn)介
本實(shí)驗采用固相萃取結合高效液相色譜的方法,建立了辣椒油中羅丹明B的檢測方法。樣品經(jīng)20%丙酮的正己烷溶液(V/V)提取,Cleanert Alumina-N固相萃取柱凈化,Venusil MP C18色譜柱(4.6 × 150 mm,5 µm,100 Å)分離,水和甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫,外標法進(jìn)行定量。結果表明,羅丹明B添加量為0.05 mg/kg時(shí),回收率在90% ~ 100%之間,能夠滿(mǎn)足檢測要求。
羅丹明B(Rhodamine B)又稱(chēng)玫瑰紅B,或堿性玫瑰精,俗稱(chēng)花粉紅,是一種具有鮮桃紅色的人工合成的染料。經(jīng)老鼠試驗發(fā)現,羅丹明B會(huì )引致皮下組織生肉瘤,被懷疑是致癌物質(zhì)。羅丹明B在溶液中有強烈的熒光,用作實(shí)驗室中細胞熒光染色劑、有色玻璃、特色*和爆竹等行業(yè)。曾經(jīng)用作食品添加劑,但后來(lái)實(shí)驗證明羅丹明B會(huì )致癌,現在已不允許用作食品染色。
因此通過(guò)有效的實(shí)驗技術(shù)手段,對辣椒油中的有關(guān)羅丹明B殘留進(jìn)行監控,以確保消費者對辣椒油消費的安全具有重要意義。
本實(shí)驗通過(guò)優(yōu)化前處理方法建立了羅丹明B在辣椒油中的高效液相色譜的檢測方法。
實(shí)驗部分
儀器、試劑與材料
主要儀器設備
高效液相色譜儀(紫外檢測器);
博納艾杰爾12位負壓SPE裝置。
試劑材料
丙酮、甲醇、正己烷為色譜純;實(shí)驗用水為超純水;羅丹明B標準品(純度99%);
一次性無(wú)菌注射器;Nylon針式過(guò)濾器(0.45 µm,直徑13 mm);
Cleanert Alumina-N固相萃取柱:2000 mg/6 mL
樣品制備
樣品提取
稱(chēng)取1 g辣椒油于40 mL玻璃瓶中,加入10 mL 20%丙酮的正己烷溶液(V/V),振蕩搖勻后待凈化。
樣品凈化
先將小柱用6 mL正己烷活化平衡,然后將待凈化液過(guò)柱,棄去全部流出液,然后用10 mL 20%丙酮的正己烷溶液(V/V)進(jìn)行淋洗,最后用10 mL 2%氨化甲醇(V/V)洗脫。收集洗脫液于40℃氮氣吹干,用1 mL甲醇溶解殘留物,過(guò)0.45 µm Nylon針式過(guò)濾器后待測。
以上凈化步驟可用卓睿全自動(dòng)固相萃取儀完成。
實(shí)驗條件
液相條件
色譜柱:Venusil MP C18,5 µm,100 Å,4.6 × 150 mm
流動(dòng)相:甲醇︰水=75︰25(V/V)
柱 溫:30℃
進(jìn)樣量:20 µL
檢測波長(cháng):550 nm
結果與討論
實(shí)驗結果
由表1可知,采用固相萃取結合液相色譜法檢測羅丹明B,辣椒油基質(zhì)加標回收率在90%以上,能夠滿(mǎn)足標準要求。
表1.辣椒油中羅丹明B加標回收實(shí)驗結果
物質(zhì)名稱(chēng) | 保留時(shí)間 | 添加水平/mg/kg | 平均回收率 /% | RSD /% |
羅丹明B | 5.578 | 0.05 | 95.7 | 1.3 |
圖1. 0.05 µg/mL羅丹明B標準溶液液相色譜圖
圖2. 辣椒油基質(zhì)空白液相色譜圖
圖3. 0.05 mg/kg辣椒油基質(zhì)加標液相色譜圖
結論
本實(shí)驗建立了辣椒油中羅丹明B殘留量的檢測方法,并結合高效液相色譜對辣椒油中羅丹明B的含量進(jìn)行了測定。對于加標量為0.05 mg/kg的辣椒油樣品,回收率在90% ~ 100%之間,符合實(shí)驗要求。
附:相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格描述 | 包裝數量 | 訂貨號 |
Venusil MP C18 | 5µm,100Å,4.6×150mm | 1支 | VA951505-0 |
Cleanert Alumina-N | 2000mg/6mL | 30支/包 | AL20006N |
Qdaura® 卓睿全自動(dòng)固相萃取系統 | 4通道 | 1臺 | SPE-40 |
15位氮吹儀 | 15位 | 1臺 | NV15-M |
保護柱套 | 適用于4.6×10mm和2.1×10mm | 1支 | SH-100 |
直聯(lián)式保護柱芯 | 5µm,100Å;4.6×10mm | 4支/包 | VA950105-0S |
1.5 mL樣品瓶 | 短螺紋透明帶書(shū)寫(xiě)處 32×11.6mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 mL樣品瓶蓋 | 9mm中心孔藍蓋,紅色橡膠/米色PTFE隔墊 45°Shore A; 1.0mm | 100/pk | 0915-1819 |
Nylon針式過(guò)濾器 | 單膜,13mm,0.45µm | 200個(gè)/包 | AS021345 |
一次性注射器 | 2 mL無(wú)針頭 | 100支/包 | LZSQ-2ML |